骨髓间充质干细胞BMSCs培养/诱导分化/成骨成脂诱导生物医学科研课题整体项目实验外包实验代做公司平台
介绍如何选择硕士/博士毕业课题医学科研分子生物科研实验外包服务及医学科研实验外包服务项目整体课题实验外包实验代做公司品牌、价格及病理实验外包生物科研分子动物实验外包代做服务公司推荐
骨髓间充质干细胞（BMSCs）
实验动物
4 周龄SD大鼠
主要试剂及仪器
DMEM/ F12培养基、胎牛血清和胰酶均购自美国Gibico 公司，CO2恒温培养箱购自美国Thermo公司。
生物医学科研课题整体项目实验外包实验代做步骤
a． 取SD大鼠，颈椎脱臼法处死后立即用75%乙醇浸泡，移入超净工作台内，用大头针固定大鼠四肢于工作台面的泡沫板上。
b． 酒擦拭四肢，再用酒精棉球擦拭，无菌条件下用灭菌消毒后的镊子和剪刀分离出大鼠股骨和胫骨,剔除骨头表面肌肉，PBS溶液冲洗两遍。
c． 从中折断骨头，用2ml无菌注射器吸取PBS溶液冲出骨髓细胞多次，再用针头吹打，吸管吸入离心管内，1000r/min离心5min，弃上清。
d． 用含10%胎牛血清及青链霉素的DMEM/F12 重悬细胞，接种于无菌培养瓶，置37℃、5%CO2恒温培养箱中培养。
e． 24小时后弃去培养液，PBS冲洗 2~ 3次去除未贴壁细胞，加入培养液继续培养。以后每2~ 3d换液1次，7~ 10d细胞生长融合，经0.25%胰酶消化，1~2传代，其后一般3d传代1次，选取生长良好的第三代细胞进行后续实验。
生物医学科研课题整体项目实验外包实验代做鉴定
胰酶消化P3代细胞，PBS洗涤2次，分别加入PE标记CD29、CD34、CD45、CD90单克隆荧光抗体，并设同型对照，室温避光孵育，应用流式细胞仪检测BMSCs的表面标志。
生物医学科研课题整体项目实验外包实验代做细胞形态
BMSCs原代培养过程中，约24小时即可出现贴壁生长,细胞呈圆形、梭形、三角形生长缓慢。换液后细胞增殖明显,出现以梭形为主的多种形态，10~14天70% ~80 %可融合达到传代标准。传代细胞形态单一，呈梭形或扁平型，增殖至细胞融合时呈漩涡状和状排列。
骨髓间充质干细胞诱导分化实验外包实验代做公司平台
（1）收集细胞：在显微镜下观察培养瓶贴壁面至70%-80%融合，在超净工作台上操作，先吸除培养瓶中旧培养基，用PBS洗2~3次，50mL培养瓶加入胰酶消化液约1-3mL，按此比例进行消化，晃动使消化液铺均匀，置37度培养箱约2-5min，镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后，轻轻振动瓶底使细胞全部脱落，加入2-3mL完全培养基后，轻轻吹打，收集细胞至离心管，1 000 rpm离心5 min弃上清，加培养液，轻轻吹打成细胞悬液。
（2）细胞接种：将上述细胞悬液接种于无菌的6孔细胞培养板，加入2mL完全培养基，放入CO2培养箱 37℃培养 。
（3）细胞诱导：待细胞至50%-60%融合时，加入含50ug/lVEGF、10ug/lFGF、10%FBS的诱导培养液，放入CO2培养箱 37℃培养，连续诱导培养21d,每隔2天换液，每周传代1次。
生物医学科研课题整体项目实验外包实验代做血管形成实验
(1) 将Matrigel放于4℃融化（不能放于室温，凝固之 后不可以再用）。灭菌的100μL枪头，24孔板冷藏备用；
(2) 开始实验时，从冰箱中取出冷藏的枪头和24孔板，在24孔板每个孔中加入150μL Matrigel。加入胶时注意保持枪头垂直于孔中间位置，Matrigel一直保持放在冰上；
(3) 加入胶后，将整个培养板放入培养箱中，放置30min使凝胶凝固；
(4) 取经不同浓度药物A处理的不同代次的主动脉内皮细胞，消化后用无血清的培养基调整细胞浓度到2×105 cell/mL；
(5) 从培养箱中取出24孔板，每孔加入200μL细胞悬液；
(6) 盖上盖子后放入培养箱培养；
(7) 24h内记录细胞变化
生物医学科研课题整体项目实验外包实验代做人间充质干细胞hMSC成骨诱导
待细胞长至基本融合后，制备完成的成骨诱导培养液（基础培养液+0.1μmol/L+ 50μg/mL抗坏血酸+ 10 mmol/L β - 甘油酸钠），每隔一天换液一次，诱导21天后再进行矿化结节的茜素红染色。
茜素红染色：
1、诱导后细胞爬片用PBS漂洗2x2min；
2、4%多聚甲醛处理（室温）20min；
3、PBS漂洗，3x2min；
4、茜素红染液染30min；
5、双蒸水冲洗2次；
6、干燥，封片。
3T3-L1脂肪细胞诱导分化成脂肪细胞
3T3-L1细胞融合至约70%时，用0.25%胰蛋白酶消化，传代至6孔培养板中，待细胞接触抑制2d后(诱导分化第0d) ，用经典鸡尾酒诱导方案诱导前脂肪细胞分化，加入分化诱导培养基1（0.5 mmol/L IBMX，1 μmol/L DEX、10ug/mL INS），72h后撤去IBMX和DEX，完全培养基中仅含有INS（诱导培养2），继续培养3d后，仅含有10% FBS，2d换液1次，诱导分化8~10d。
生物医学科研课题整体项目实验外包实验代做注意事项：
1) 待细胞接触抑制后2d加入诱导剂。太早，细胞没有退出生长周期。太迟，细胞诱导后容易漂浮。
2) 3T3细胞株20代以后分化困难，最好挑选5代左右开始诱导分化。将细胞冻存起来，使用时再复苏。
3) 大约需要8~10天，可以诱导分化成功。之后换液处理需要轻缓，以免损失细胞。
生物医学科研课题整体项目实验外包实验代做细胞细胞形态学观察
倒置显微镜下观察分化前3T3-L1前脂肪细胞呈梭形，胞浆内无脂滴，分化后3T3-L1前脂细胞呈圆形，胞浆内含有大量的脂滴。
提供整体生物医学科研课题实验项目外包实验代做技术服务项目
| 分子生物学检测 | 蛋白质与免疫学 | 动物实验 |
| 实时荧光定量PCR | 单克隆抗体制备 | 帕金森疾病模型 |
| 免疫共沉淀（Co-IP） | 多克隆抗体制备 | 抑郁症动物模型 |
| ELISA（酶联免疫吸附法）技术 | Western-blot 实验服务 | 脊髓损伤模型 |
| 生化指标检测 | 蛋白双向电泳实验服务 | 脑外损伤模型 |
| 双荧光素酶报告基因检测 | 原核蛋白表达纯化 | 骨神经损伤模型 |
| 染色质免疫共沉淀（ChIP） | 真核蛋白表达纯化 | 心肌缺血模型 |
| GST pull Down | ITRAQ定量蛋白质组学 | 心力衰竭模型 |
| SLAC蛋白组学 | 肺动脉高血压动物模型 | |
| 高血压模型 | ||
| 病毒包装 | 实验课题整体外包 | 粥样动脉硬化模型 |
| 过表达/干扰慢病毒包装纯化 | 整体课题外包 | 大脑中动脉阻塞模型 |
| 过表达/干扰腺病毒包装纯化 | 细胞整体实验外包 | 慢性之气管炎模型 |
| 逆转录病毒包装纯化 | 动物整体实验外包 | 过敏性哮喘模型 |
| 腺相关病毒包装纯化 | 肺炎大鼠模型 | |
| 肝炎-肝硬化-肝癌模型 | ||
| 蛋白芯片 | 原代细胞培养 | 肝纤维化模型 |
| 细胞因子芯片 | 骨髓间充质干细胞培养 | 胆结石模型 |
| BioPlex悬浮芯片 | 脂肪干细胞培养 | 急性胰腺炎模型 |
| 生长因子芯片 | 心肌成纤维细胞培养 | 急性肾衰竭模型 |
| 炎症因子芯片 | 软骨细胞培养 | 体内血栓模型 |
| 血管生成因子芯片 | 血管内皮细胞培养 | 关节炎模型 |
| 凋亡因子芯片 | 神经元细胞培养 | I型和II型糖尿病模型 |
| 趋化因子芯片 | 内皮组细胞原代培养 | 裸鼠成瘤 |
| HuProt TM 20K人类蛋白组芯片 | 基因编辑动物 | |
| 电生理相关服务 | 动物整体实验服务 | |
| 膜片钳实验 | ||
| 细胞生物学检测 | 高通量测序 | 代谢组学 |
| 细胞原代培养 | mRNA测序 | 气相色谱GC/MS |
| MTT检测 | LncRNA测序 | 液相色谱LC/MS |
| 细胞凋亡检测 | 全基因组测序 | 核磁共震NMR |
| 细胞周期检测 | RNA-Seq测序 | |
| 细胞克隆形成实验 | 外显子测序 | 影像学相关实验 |
| Transwell细胞迁移/侵袭 | 16s扩增子测序 | Micro-CT |
| 流式分选 | Small RNA测序 | 小动物活体成像 |
| CCK8/XTT检测 | 宏基因组测序 | 核磁共振 |
| 台盼蓝检测细胞活性 | 单细胞测序 | PET-CT |
| 药物筛选细胞学实验 | circleRNA测序 | |
| 细胞粘附性检测 | 甲基化测序 | 基因编辑动物 |
| 细胞划痕实验 | 条件性敲除小鼠/大鼠 | |
| 细胞生物学整体实验 | 全基因敲除小鼠/大鼠 | |
| 细胞成管实验 | ||
| 病理检测 | CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入 | 基因芯片 |
| 扫描电镜 | 基因定点突变细胞系 | LncRNA芯片 |
| 透射电镜 | 单基因敲除细胞系 | miRNA芯片 |
| HE染色 | 多基因敲除细胞系 | mRNA芯片 |
| 免疫组化 | 目的基因敲入细胞系 | 甲基化芯片（限人和小鼠来源样本） |
| Tunel（原位末端凋亡法）检测 | 报告基因敲入细胞系 | SNP芯片（限人和小鼠来源样本） |
| 激光共聚焦 | miRNA/LncRNA敲除细胞系 | |
| 免疫荧光 | ||
| Masson染色 | CRISPR/Cas9动物敲除/敲入 | 科研设计指导&文章评估/润色 |
| 原位杂交 | 基因敲除大鼠/小鼠 | 科研文献论著翻译 |
| 荧光原位杂交 | 基因敲入大鼠/小鼠 | 论文翻译润色服务 |
| 特殊染色（PSA、茜素红、阿尔新蓝等） | 临床实验/科研实验设计方案指导 | |
| 行为学检测 | 药物筛选服务项目 | 药效学评价 |
| 旷场实验 | 高通量自动药物筛选平台 | 抗肿瘤药物药效学评价 |
| 重复性刻板行为检测 | 细胞高内涵药物筛选平台 | 心血管系统药物药效学评价 |
| 动物跑台检测 | 蛋白质组学靶标研发平台 | 泌尿系统药物药效学评价 |
| 强迫游泳 | 分子药理研究平台 | 内分泌系统药物药效学评价 |
| 生物膜片钳药物筛选平台 | 抗炎免疫药物药效学评价 | |
| 常规药物体外筛选 |
【生物医学科研项目整体实验平台合作项目】
分子生物学、细胞生物学、病理染色检测、细胞敲除&敲入、模式与转基因动物、SPF动物保种、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、SiRNA与纳米载药、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务！
联系我时请说明是在生物医学科研网——分子生物临床医学动物实验外包委托现货各月龄C57老龄鼠老龄小鼠价格优惠基因敲除小鼠购买5xFAD小鼠价格现货自然衰老小鼠模型购买C57老年鼠老年小鼠价格C57老龄鼠购买C57老年鼠价格优惠apoe小鼠购买价格dbdb小鼠购买价格优惠app/ps1小鼠购买价格3xtg小鼠购买价格优惠看到的，谢谢！
