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【Apoe小鼠载脂蛋白动脉粥样硬化基因敲除APOE小鼠价格】

发布时间:2023-05-03 20:17:26  来源:Apoe小鼠载脂蛋白动脉粥样硬化基因敲除APOE小鼠价格  浏览:   【】【】【

Apoe小鼠载脂蛋白E高脂血症APOE动脉粥样硬化模型价格优

载脂蛋白E(apolipoprotein E, ApoE)基因敲除小鼠已经广泛应用于高脂血症、动脉粥样硬化、非酒精性脂肪肝动物模型及其并发症的研究,以及ApoE的生理功能的研究。

无论从哪里获得ApoE基因敲除动物,你可以不了解ApoE基因是怎样敲除或沉默的,但不能不把握这种动物的特点,因为这是进行科学的实验设计所必需的。因此,下面进行简要介绍。

一、了解ApoE的关键点


(1)ApoE缺失后,动物体内脂蛋白代谢和转运发生一系列改变,导致的是胆固醇的清除率降低。

正是这个原因,胆固醇在血浆中聚积,血浆胆固醇高于正常动物。也正是这个原因,随着饲料中胆固醇含量升高和喂养时间的延长,血浆胆固醇不断升高。

因此,研究中采用高胆固醇饲料时,饲料中胆固醇含量决定了血浆胆固醇水平,在饲料胆固醇含量过高时,很可能研究结果包含了胆固醇本身的毒性作用。

所以,模型饲料中胆固醇含量的设定以及生产过程中胆固醇的准确添加对于研究结果的可靠性和可重复性至关重要。

(2)ApoE缺失后的动物发生自发性动脉粥样硬化。

ApoE基因敲除动物随着月龄增加将出现大量类似动脉粥样硬化前期的损伤。正是这个原因,应当注意:

如果你获得的ApoE动物的月龄偏大时,其体内动脉粥样硬化可能已经发生。

如果你喂养的饲料中不同脂肪酸的比例不科学或者含有胆固醇,将加重体内的高血脂和动脉粥样硬化的发生和发展。

因此,喂养一般的大小鼠普通饲料不适合ApoE动物喂养的日常喂养,也不适合作为模型饲料的对照饲料。建议采用代码为LAD0011的专用饲料,详细情况,请点击:LAD0011介绍:脂蛋白代谢及其相关的基因工程大鼠和小鼠的日常喂养饲料

(3)ApoE缺失后的动物是全身性不正常的动物。

文献资料中常常是类似这样的表达“ApoE主要分布于极低密度脂蛋白(VLDL)、乳糜微粒(cM)及其残骸中”,请注意,这是对血浆中ApoE的分布进行描述的。实际上,ApoE的合成来自于全身各部位的组织和细胞(主要是肝脏、脑和小肠,其余包括肾上腺、卵巢、单核巨噬细胞系统/网状内皮细胞)。ApoE合成的目的不仅是为了血浆中脂蛋白在转运和代谢,而且是与其合成部位的细胞功能的需求和代谢相一致的。因此,ApoE缺失的动物表现为全身性的代谢和功能异常。

这就告诉我们,当我们采用ApoE基因敲除动物开展研究时,要避免“只见树木,不见森林”。例如,当用于研究高脂血症、动脉粥样硬化时,不要忘记其他多种器官、多种组织或者多种细胞的处于ApoE缺失状态,功能可能已经被改变。相似地,如果应用于研究ApoE在其他组织和器官中的功能时,不要忘记这种小鼠的血脂、血管、肝脏功能和形态学等方面已经不正常。

(4)ApoE基因敲除动物的对照动物是母本动物(Wild-type,the background strain control)

要观察和比较ApoE的功能,应当采用其母本动物。例如,如果ApoE基因敲除动物是在C57BL/6中进行敲除或沉默的,那么,只有与C57BL/6作为ApoE的对照动物(ApoE+/+),而不应当采用其他品系的小鼠。

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二、用于ApoE敲除小鼠的普通饲料和模型饲料注意事项


从上面的总结,我们已经了解到ApoE敲除或缺失的小鼠在日常喂养饲料方面需要重视其质量,模型饲料中脂肪类型和含量以及胆固醇的水平对于动物机能和研究结果的可靠性和可重复性非常关键。

现在,我们要提醒研究者注意的是,目前我国实验动物饲料市场并不乐观,在模型饲料方面,以次充好、忽悠研究者的现象并不少见,还有一个非常严重的问题威胁着研究结果,那就是胆固醇市场混乱不堪,时常有研究者告诉我们其研究被市场上假胆固醇、劣质胆固醇坑害。

除了胆固醇原料的级别、纯度及其准确性之外,还有一个非常重要的问题是,由于胆固醇的添加量非常小,没有特定的技术很难使得胆固醇在模型饲料中分布均匀,导致的结果是,所喂养的动物血浆胆固醇波动较大或者不能按照预期的方向发展,或者导致研究结果不能被自己的实验室今后进行重复,不能被其他研究者所重复。

正是ApoE敲除小鼠对日常喂养饲料和模型饲料的高要求,南通特洛菲饲料科技有限公司不仅专门开发了适用于这种动物的日常普通喂养饲料,而且在模型饲料制作上进行严格控制。



Apoe小鼠基因敲除apoe小鼠构建是利用基因打靶技术产生转基因动物的程序,基因敲除小鼠构建程序一般为(1) 构建基因打靶载体; (2) 将基因打靶载体通过一定的方式(常用电穿孔法) 导入同源的胚胎干细胞中,使外源DNA 与胚胎干细胞基因组中相应部分发生同源重组,将打靶载体中的DNA 序列整合到内源基因组中从而得以表达; (3) 筛选发生同源重组的阳性克隆,通过显微注射或者胚胎凝集的方法将经过遗传修饰的ES细胞引入受体胚胎内制作嵌合体小鼠,在生物活体中研究特定基因的功能。基因敲除小鼠使得研究者们能够观察到某一特定基因完全失活后小鼠表型的改变,从而推断出特定基因的作用。

Apoe小鼠基因敲除apoe小鼠构建基因打靶的原则是, 外源DNA 片段含有与目的基因的某一段核酸序列相同或接近的同源序列, 同源重组就发生在这两个序列之间。基因敲除小鼠外源DNA 序列的定位整合有两种方式, 即插入型(又称O 型) 和置换型(又称8 型)。与此相对应, 基因敲除小鼠构建打靶载体可分为两类: 插入型载体和置换型载体。
同源重组方法(及基因敲除小鼠)
如果研究者想用基因工程载体代替其等位基因,同时又不会对基因组上的其他基因造成任何影响,那么最好的选择就是进行同源重组。要进行这一操作,首先要知道靶基因的DNA序列(如图1)。有了这一信息,用你的目标序列替换任何靶基因就都成为可能。关于同源重组的方法,除本章图解外还有更多的细节,这里只介绍基本的原理。
基因敲除小鼠构建需要被基因工程载体所替代的靶基因图谱。编码序列由方框标出,其上下游侧翼DNA序列也被标明。由靶基因向两侧延伸的箭头代表染色体上其他的连续DNA序列。
基因敲除小鼠构建接下来的步骤就是设计并构建DNA载体,用以插入并替代染色体上的等位基因。这一载体可以包含你所选择的任何DNA序列,用来将不同的等位基因,即研究者所要插入的目标序列(编码区或非编码区均可)或报告基因(例如:抗生素抗性基因或绿色荧光蛋白)插入基因组中。但不论插入哪种序列,都需要包含一些与靶基因上下游侧翼序列一致的DNA序列(如图2).除了阳性筛选标记(例如抗生素抗性基因),通常还需要在载体中加入阴性筛选标记(例如胸苷激酶,tk)。通常阴性标记位于载体上与靶基因同源的序列之外。
基因敲除小鼠构建用于同源重组的基因工程载体图谱。取代序列的上下游侧翼序列与靶基因的上下游侧翼序列一致。阴性筛选标记tk位于载体上与靶基因同源的序列下游。
基因敲除小鼠构建基因工程载体被加入到包含靶基因的细胞中。其替代等位基因的机理还不完全清楚,但是与细胞减数分裂和有丝分裂中同源染色体在细胞板处联会非常相似,基因工程载体能够找到靶基因并在与之相同的DNA序列处发生同源重组(如图3)。这种重组可能发生在二者相同侧翼序列的任何位置,但具体位置则由细胞本身决定,而不是人工能够控制的。
基因敲除小鼠构建同源重组发生前的载体与靶基因。令人惊奇的是,载体自身能够进入细胞核并与靶基因并排排列。这种排列的机制尚不清楚,但是在某些物种中,这种排列的确比其他物种中的更完美,酵母就是其中之一。小鼠是用于同源重组的较好的哺乳动物系统,但是其中重组发生的效率不如人类细胞高。
细胞发生同源重组后,新的DNA片段即目标序列被插入了基因组中。其中只是靶基因及其上下游的一些侧翼序列被载体中同源的部分所取代,基因组的其他部分并不受到影响(如图4)。在载体与靶基因发生重组后,最初的靶基因序列被交换到了载体上。由于载体不能够在细胞核中独立地进行复制,因此随着细胞的分裂很快就丢失了。而被替代后的基因组则忠实地进行自我复制,此时新插入的目标序列也就得以复制了。
发生了同源重组的细胞(带有阳性筛选标记)可以用加入了特定抗生素的培养基筛选出来。需要注意的是,阴性筛选标记并没有通过同源重组整合到染色体中。
基因敲除小鼠构建同源重组发生后的产物。此时染色体上的靶基因被载体携带的目标序列所取代,同时还包括一些与载体一致的侧翼序列。而靶基因则被交换到载体上,随着细胞的分裂而丢失。自此,插入到基因组中的目标序列就会像其他所有序列一样,随着基因组的复制而被忠实地复制。
如果载体与基因组上的非同源区域并排排列,就可能发生任意的非同源重组,此时载体上携带的阴性选择标记就会被整合到基因组中(如图5)。
非同源重组发生前的载体与靶基因。此时发生的重组是任意的。需要注意的是,在这种情况下,阴性筛选标记被整合到了基因组中。
发生了非同源重组的细胞(如图6)在阳性筛选标记的特定抗性培养基中能够存活。但是,有一种药物叫做更昔韦洛(gancyclovir),能够杀死任何携带有tk基因的细胞。因此,发生了同源重组的细胞就可以在抗生素与更昔韦洛同时存在的培养基中存活,而发生了非同源重组的细胞则会被更昔韦洛杀死。
非同源重组发生后的产物。阳性和阴性筛选标记同时进入细胞染色体,因此更昔韦洛能够杀死发生了非同源重组的细胞。

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责任编辑:Apoe小鼠载脂蛋白动脉粥样硬化基因敲除APOE小鼠价格
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